781.裂

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<b></b>【后天或者元旦完结】

?有很多研究发发现昼夜节律相关因子的失调与n的复发和转移有关，因此识别出昼夜节律相关因子也是目前临床所需要的。该研究发现，hf在早期复发的n组织中显著降低，与n患者的早期进展与远处转移显著相关。并且上调hf可抑制肺定植，而沉默hf可促进体内n细胞向骨、肝和脑的转移。

?机制下调hf促进非锚定的n细胞在低营养条件下的无氧代谢，通过pparα和pparγ转运、激活nf-b/p65信号通路，基因的缺失和甲基化均有助于下调n组织中的hf的表达。hf有可能成为临床干预n的新靶点。

?虽然多种治疗策略对原发性非小细胞肺癌的治疗具有良好的前景，但由于其早期复发和广泛的转移潜力，非小细胞肺癌仍然是癌症相关死亡的主要原因。

?从名字上说，昼夜节律相关分子由一系列的时钟基因和蛋白质组成，在睡眠周期的调节中发挥着重要作用。越来越多的研究报道，昼夜节律相关调节因子的失调通过不同的机制与肿瘤的发生和转移有关。近年来，生物钟基因在n中的作用得到了广泛的关注。例如，在肺腺癌中，过表达ry2、ba1和rra联合下调tiee和npa2的表达与预后良好相关，而de1和tiee高表达预示着在鳞状细胞n中较差的总生存率。

?通过分析来自癌症基因组图谱(tga)的n数据集中的多个昼夜相关调控因子和我们之前来自array表达(ae-eta)的整合rna表达谱，在目前的研究中，我们辨认出了一个昼夜基因——肝白血病因子(hf)，它是脯氨酸和富含酸性氨基酸的碱性亮氨酸拉链转录因子家族(parbzip)的成员，在早期复发的n组织中显著减少，这与n患者的早期进展和远处转移显著相关。

?来自tga的nrna测序数据集，我们发现与相邻正常组织(ant)相比，n组织中hf的表达水平显著降低。通过分析来自tga的n数据集，与非复发的n组织3年内未复发，n=72）相比，hf也是早期复发的n组织（一年内复发，n=72）中所有昼夜节律相关调节下调因子之一。

?我们之前基于affyetrixu133pu20芯片(ae-eta)结合tga分析的n整合数据谱的结果进一步表明，n组织中hf的表达显著下调，并且在早期复发的n组织中进一步减少（补充图a，b）。

图片?rea-tiepr和etern印迹分析显示，与匹配的ant相比，7/10对n组织中hf的rna和蛋白水平降低(图1和d）。

?eternbt分析配对n组织中hf蛋白水平与配对ant的比较。α-微管蛋白作为负载控制。

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?1年复发n组织(n=5)与3年非复发n组织(n=5)的hfrna表达和蛋白水平。转录水平归一化为gapdh表达，p

?此外，与非复发n组织相比，早期复发n组织中hf表达显著下调（图1e，f）。

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?不同亚型n及良性肺疾病组织中hf免疫组化染色的典型图片（图a）。恶性n组织和良性肺组织中hf不同免疫组化染色指数的病例数(良性肺组织，n=64;ad，n=204;q，n=112;非小细胞肺癌其他亚型，n=26)（图b）。与tga(ant)(ant、=109、ad、=511、q、=502)相比，ad和q中hf表达下调（图）。来自tga和ae-eta的n数据集证明了这一点（d，e）

?-eier生存分析进一步显示，与高hf表达的n患者相比，低hf表达的n患者的无进展生存期更差(图2f)，这与tga、ae-eta和-ptter分析结果一致(图2g-i)。

?同样，在低hf表达的ad和q患者中观察到较短的无进展生存期(图2j-q)。

以上结果说明，低表达hf与n的晚期临床病理特征和早期进展相关。

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?此外，hf的表达水平随着临床分级和阶段（补充图1g–i）的提高而逐渐下降(补充图1e，f）。

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?我们首先将n患者分为i级至iii级和i级至iv级的不同亚组，如补充图2a-f所示，在相同病理分级下，低表达hf的n患者的无进展生存期较高表达hf的患者短。相应的，根据多个独立数据集，包括我们的样本(补充图2g和h)，tga（补充图2i和j），ae-eta(补充图2和)和-ptter(补充图2?)，在相同临床阶段的n患者中也有类似的发现。

?综上所述，我们的研究结果表明，低表达hf与n患者的早期进展和晚期临床病理特征显著正相关。

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?进一步研究发现，在n患者中，hf下调与较短的局部无复发生存期和远处无转移生存期呈正相关(补充图3a-d)。同样，低表达hf的ad患者以及q患者(补充图3i-)的局部无复发生存期和远处无转移生存期较差(补充图3e-h)。以上结果说明，低表达hf促进n早期局部复发和多器官远处转移。

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?为了进一步确定hf在n细胞局部肺定植和远处转移中的作用，首先在多个不同亚型的n细胞株中检测了hf的表达。

?如补充图4a和b所示，与非癌永生化肺支气管上皮细胞bea-2b和正常肺成纤维细胞i-38相比，n细胞中hf的rna和蛋白质水平差异下调。我们进一步构建了hf过表达的ni-h1975(h1975)和ni-h520(h520)肺癌细胞，这些细胞表达所有n细胞系中hf水平最低，并内源性下调ni-h460(h460)和ni-h1299(h1299)细胞hf的表达，这两种细胞均表达最高的内源性hf水平(补充图4和d）。

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?采用小鼠尾静脉模型研究n细胞的肺定植和生长能力。如图3a-d和补充图4e，上调hf显著抑制h1975细胞在肺中的肿瘤发生，表现为肺结节的形成减少，每㎡的癌细胞数量减少，累积生存率延长。相反，沉默hf对h460细胞有相反的效果(图3a-、e和补充图4e)。

?值得注意的是，hf表达的改变不仅影响大肺结节的形成(在分析的肿瘤切片中定义为>50肿瘤细胞)(图3b)，但也影响小肺结节的形成(在分析的肿瘤切片中定义为5-50个肿瘤细胞)(补充图4e)，这支持了hf在肿瘤细胞的早期定植和随后的肺内生长中都起着重要作用的观点。谷

?最后，与实验结束时相比，在注射hf稳定过表达的h1975细胞和下调h460细胞的小鼠肿瘤组织中，进一步证实了相应的高和低表达水平(补充图4f)。