781.裂

请关闭浏览器的阅读/畅读/小说模式并且关闭广告屏蔽过滤功能，避免出现内容无法显示或者段落错乱。

图片

?然后，采用体内左心室接种小鼠模型检测hf对n远处转移能力的影响，将载体/ni-h1975、hf过表达ni-h1975、载体/ni-h460和hfh1/ni-h460细胞接种到小鼠左心室。

?接种细胞6周后，收集小鼠的胫骨、脑、肝组织，并进行h&e染色处理。如图所示。图3f-i和补充图4g，我们在与载体组相比，过hf表达小鼠组中，包括骨、大脑和肝脏等远处器官检测到较少的转移性肿瘤，以及较长的累积存活期延长。

?相比之下，沉默hf可显著增强骨、脑和肝脏转移瘤的形成，并缩短生存期(图3f-i和补充图4h)。

?因此，这些结果表明，低表达hf的n细胞具有更强的局部定植和生长能力，以及更强的远处转移能力。

图片

?我们利用-8、集落形成和an连接素凋亡进一步研究了hf在n中的生物学功能，发现在正常培养条件下，hf对n细胞的增殖和凋亡能力没有显著影响(补充图5a–)。

?我们的结果显示，上调hf会增加培养液的ph水平，而沉

默hf会降低培养基的ph水平，但正常情况下hf并不影响n细胞的表型和数量(补充图5d)。

?低表达hf可能通过营养代谢途径促进n细胞对低营养状态的适应，因为即使在正常的含氧条件下，癌细胞也更倾向于通过厌氧途径代谢。

图片

?然而，上调hf抑制n的生长，而沉默hf可促进n细胞的锚定和悬浮生长能力(图4a和b)，表明沉默hf增强了n细胞在悬浮条件下的生存能力，即anii耐药。这是各种癌症中与远处转移有关的转移性癌细胞的主要特征。

?事实上，昼夜节律基因的失调导致了n的代谢失调，hf广泛参与了多种物质代谢过程，包括脂质和氧化代谢。

?在低血清(1)和低葡萄糖(1g/)培养液组成的低营养条件下，hf过表达抑制了

n细胞的增殖，但增加了凋亡潜能，反之亦然（图4-e）。

?hf参与了癌细胞生长培养基的营养代谢，这是hf抑制n细胞生长的前提条件。

?在低营养条件下观察n细胞hf对葡萄糖、脂肪酸和蛋白质的影响。如补充图6a，hf表达的改变并不影响总蛋白含量。然而，hf的上调降低了葡萄糖、甘油三酯的消耗和乳酸的分泌，但增加了游离脂肪酸的水平(图4f–i)。

?矛盾的是，上调hf增加了细胞内atp的总产生和dh的活性(补充图6b和）。这些发现表明，在低营养条件下，过表达hf的癌细胞更容易发生有氧代谢而不是厌氧代谢，这进一步支持了上调hf降低乳酸脱氢酶(dh)的活性，厌氧糖酵解限速酶，一些厌氧糖酵解和乳酸发酵相关基因，但增强了多个三羧酸循环相关基因(。

?相反，沉默hf则表现出相反的代谢特性，促进了n细胞的厌氧代谢(图4f-i和补充图6和d)。上诉结果表明，低表达hf促进非小细胞肺癌细胞的厌氧代谢。

?事实上，即使在氧含量正常的情况下，癌细胞也表现出葡萄糖代谢特征的改变，更倾向于无氧代谢，这一现象被称为“瓦伯格效应”。综上所述，我们的结果表明，低表达hf可促进n细胞从三羧酸循环向厌氧代谢的首选代谢途径的转换，从而进一步促进细胞在低营养条件下的生长。

?为了进一步确定低营养条件下hf抑制n生长和转移的潜在机制，我们将多个信号通路的荧光素酶报告质粒转染到n细胞中。如图5a所示，上调hf显著增强了n细胞ppar信号活性，抑制了nf-b信号活性;相反，沉默hf则产生相反的效果(图5a)。

?基于tga的n数据集中hf的表达进行了基因集富集分析(gea)，结果显示hf的表达水平与ppar信号呈正相关，而与nf-b信号呈负相关。根据gea分析，hf表达与脂质氧化和糖酵解显著相关(补充图6f)。

?重要的是，一些证据表明，hf通过增加脂解诱导的游离脂肪酸积累，参与ppar的易位和激活，通过破坏p65与靶dna的结合，nf-b信号通路广泛参与了癌症的进展和转移。ppar信号通路由pparα、pparβ/δ和pparγ等几个家族成员组成。因此，确定参与hf抑制nf-b信号通路以及n肿瘤发生和转移的特异性ppar成员至关重要。

?首先，检测10对n组织中pparα、pparβ/δ和pparγ的表达水平。如补充图6g和h，pparα在4/10对组织中表达显著下调，pparγ在8/10对表达，而pparβ/δ在8/10对组织中表达上调。&nbp;已有广泛报道称pparα和pparγ在n中起肿瘤抑制信号的作用，而据报道pparβ/δ对起致癌作用。

?eternbt分析一致显示，hf的上调增加了pparα和pparγ的总表达和核易位，增加了ibα的表达，但降低了磷酸化的nf-b和p65的总水平和核水平。相反，沉默hf则发挥了相反的作用。因此，我们的研究结果表明，hf在n中激活pparα和pparγ，抑制nf-b/p65信号通路。

?我们使用pparα激动剂非诺贝特、ppa

rγ激动剂吡格列酮和nf-b信号抑制剂y2409881，进一步研究了pparα/pparγ/nf-b/p65信号轴在hf在n细胞中的功能作用中的意义。

?我们的结果显示，在hf沉默的细胞中，非诺贝特和吡格列酮显著上调了ppar的活性，而y2409881则没有上。

?然而，非诺贝特、吡格列酮和y2409881差异降低了hf沉默细胞中nf-b信号的活性。

?重要的是，非诺贝特、吡格列酮和y2409881减弱了hf下调对细胞非锚定生长和抗缺氧能力的刺激作用。相反，非诺贝特、吡格列酮和y2409881逆转了低营养条件下hf下调对n细胞的促增殖（克隆生长）和抗凋亡作用

。